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Olis光譜儀 CPL圓偏振熒光光譜儀 圓二色光譜儀 應用領域分析

更新時間:2022-05-10   點擊次數(shù):2194次

美國Olis光譜儀 CPL圓偏振熒光光譜儀 CD圓二色光譜儀 應用領域分析

 

蛋白質(zhì)二級結構

在研究蛋白質(zhì)折疊,蛋白質(zhì)穩(wěn)定性或酶活性時,蛋白質(zhì)二級結構是重要的考慮因素。

用于監(jiān)視二級結構的強大工具是圓二色性(CD),它是左右圓偏振光的吸收差。由于蛋白質(zhì)由手性氨基酸組成,因此它們具有CD活性,并顯示出對CD的二級結構敏感的*CD光譜。該光譜可以提供蛋白質(zhì)結構的定性快照,或者可以使用多種算法從遠紫外CD光譜估算蛋白質(zhì)的二級結構組成,其中一些算法可在Olis GlobalWorks軟件中獲得。

蛋白質(zhì)二級結構也可用于監(jiān)測蛋白質(zhì)折疊和解折疊。平衡研究包括隨溫度或化學變性劑增加而變化的CD光譜集合。隨著蛋白質(zhì)的展開,CD光譜反映了這一點。在此變性過程中以單個波長或全光譜掃描擬合數(shù)據(jù)可提供熱力學信息,例如熔融溫度和展開焓。這兩個參數(shù)都提供了有關所研究蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的重要信息。

在DSM 17, DSM 20,DSM 1000,和多掃描支持蛋白質(zhì)二級結構研究。CD 250 Peltier電池座等附件為進行這些實驗提供了一種便捷的方法。

停止流

蛋白質(zhì)折疊和展開的動力學可以通過使用停止流附件進行監(jiān)測??梢酝ㄟ^在停止流動反應過程中觀察信息波長的CD信號來研究蛋白質(zhì)結構的毫秒變化。GlobalWorks還支持對這些動力學軌跡進行動力學分析。

酶學

酶催化的機制對生物化學領域的許多研究人員而言很重要。酶活性測量的常用方法包括監(jiān)測酶和底物溶液隨時間變化的吸光度或熒光。隨著反應的進行,吸光度或熒光的變化報告了產(chǎn)物濃度的增加。

穩(wěn)態(tài)動力學

穩(wěn)態(tài)動力學測量涉及在整個測量過程中監(jiān)測酶/底物復合物在恒定濃度下表現(xiàn)出的吸光度或熒光變化。幾種Olis儀器支持穩(wěn)態(tài)動力學的測量。這些包括諸如HPDA 8452,Cary 14,Cary 17, DW2,DW2000,DB620和RSM 1000的吸收模型,以及諸如DM 45和DM 245的熒光模型。

穩(wěn)態(tài)前動力學

穩(wěn)態(tài)前動力學涉及測量酶/底物復合物的形成??梢詫⑼V沽髁扛郊砑拥酱蠖鄶?shù)此類儀器中。其他配件包括TLC 50,四格珀耳帖(Peltier)炮塔和自動酶測定儀。Olis CLARiTY室為在高散射環(huán)境(例如全細胞或線粒體懸浮液中)中測量酶動力學提供了令人興奮的新可能性。

DNA結構/構象

DNA的結構和構象是研究DNA與蛋白質(zhì)和其他DNA配體相互作用的重要考慮因素。確定DNA結構和構象的技術包括X射線晶體學,圓二色性(CD),熒光和紫外可見吸收光譜。除X射線晶體學外,所有這些技術均由Olis儀器提供支持。

圓二色性

DNA在200-250 nm區(qū)域表現(xiàn)出*的CD光譜,該光譜對DNA結構特別敏感。當添加擾動劑(例如溫度升高或DNA配體)時,CD光譜可用于探測DNA結構。典型的實驗包括在溫度升高或?qū)⑴潴w添加到樣品中的同時收集光譜。

所有Olis CD型號DSM 17,DSM 20,DSM 1000和Protein Machine都支持DNA的CD測量,并且包括諸如CD 250 Peltier溫控細胞架,用于配體結合的自動滴定儀和用于動力學研究的Stopped-Flow等附件。

熒光性

無論是直接來自DNA分子還是來自外部探針,熒光都是闡明DNA結構信息的有價值的技術。發(fā)射最大值和熒光強度變化揭示了有關DNA結構完整性的信息。結合熒光探針在結合DNA后顯示出極大的熒光強度增強,并且也是有用的DNA結構探針。熒光能量轉(zhuǎn)移(FRET),其中兩個具有重疊發(fā)射和激發(fā)光譜的探針連接到同一DNA分子。從供體染料轉(zhuǎn)移到受體染料的能量是兩者之間距離的函數(shù)。因此,F(xiàn)RET探針可以成為監(jiān)測適當標記的DNA分子經(jīng)歷的結構變化的有價值的工具。所有Olis Fluorescence型號DM 45,DM 245,SLM 8000,SPF-500,RSM 1000F和Cary熒光系統(tǒng)的理想配置是支持DNA的熒光研究。DSM 17,DSM 20和DSM 1000也可以配置用于CD和熒光研究。

熒光各向異性

熒光各向異性是熒光探針遷移率的量度,也可用于觀察DNA結構和構象。在該技術中,熒光探針被垂直偏振光激發(fā),發(fā)射的偏振量與熒光壽命期間熒光探針的遷移率有關??焖僖苿拥奶结槍?去極化(各向異性為零),而較慢的探針(例如與DNA結合的探針)將保持部分極化(非零各向異性)。Olis Polarization Toolbox附件為任何Olis熒光計(SLM系列除外)增加了各向異性功能。其他有用的附件包括TLC 50 Peltier池架,4池Peltier炮塔,自動滴定儀和Stopped-Flow。

紫外線吸收

DNA的紫外吸收光譜也揭示了有關DNA結構的重要信息。盡管由于結構差異而引起的變化通常很小,但是GlobalWorks中的Olis擬合算法甚至可以消除最小的光譜變化。該RSM 1000, OLIS 14/17和HPDA 8452支持的紫外-可見吸收光譜的集合到探針DNA結構。有用的附件包括TLC 40珀耳帖電池固定器和停止流。

線粒體代謝

光譜學的缺點之一,特別是影響吸收率的是光散射對測量的影響。高度散射的樣品將增加市場上絕大多數(shù)分光光度計的表觀吸收率。儀器無法區(qū)分散射光和吸收光。實際上,該偽影通常用于通過測量600 nm的表觀吸光度來大致定量細菌細胞培養(yǎng)物。

渾濁樣品

在1980年代,隨著Aminco DW2和后來的DW2000的推出,部分解決了這個問題。Olis仍然支持這些驚人的光學平臺。但是,Olis現(xiàn)在通過CLARiTY系列儀器在該設計上居于**地位,該儀器具有在存在高散射介質(zhì)的情況下記錄真實吸收光譜的能力。Olis CLARiTY系列儀器非常適合監(jiān)測線粒體懸浮液,整個細胞或其他高度散射環(huán)境中的吸光度變化。

CLARiTY系列產(chǎn)品包括RSM 1000,DM 245和DB 620光學平臺。RSM 1000配置允許收集快速掃描,通常配置為每秒最多測量100次掃描。DM 245和DB 620配置為隨時間進行單個波長測量或用于常規(guī)吸光度掃描。CLARiTY室包括磁力攪拌和25至80 C temperature的溫度控制。常用附件包括TLC 50(用于RSM 1000),StepDisk(用于RSM 1000),Twin Peltier(用于DW2 / 2000)和熒光模塊(用于DW2 / 2000)。

化學動力學

反應動力學是實驗室和教室化學研究的重要組成部分。動力學分析的概念是許多本科化學課程的基礎,也是許多研究項目的基礎。Olis支持通過光譜學在紫外線,可見光或近紅外光譜區(qū)域內(nèi)以微秒到小時的時間范圍監(jiān)視反應。動力學反應可以通過多種方法觸發(fā),包括手動混合,停止流混合或快速光解。但是,可以由TTL信號啟動的任何觸發(fā)器都可以集成到Olis系統(tǒng)中。

吸光度和熒光

強大的Olis動力學系統(tǒng)是RSM 1000,可以輕松配置以用于從深紫外到近紅外的任何波長范圍。其獲得的ScanDisk技術支持每秒最多收集1000次光譜掃描。為了以更適中的速率吸收光譜,HPDA 8452以高達10次掃描/秒的速度收集光譜掃描。RSM 1000,DB 620或HPDA 8452可用于單波長動態(tài)波長。

的DM 45,DM 245,RSM 1000F,和SLM系列熒光計提供的能力來監(jiān)控熒光反應為好。

停流,閃光燈,LED,Peltier TLC 45,Peltier TLC 50和電磁攪拌器是這些測量的常用附件。

 

 

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